SP 6FF强阳离子交换预装柱5mL
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FAQ
COA
已发表文献
离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。
SP强阳离子交换层析填料FF以高度交联的6%琼脂糖为基架,可耐受较高的流速及更高的化学稳定性,适合实验室及工业大规模纯化。本品带电基团-SO3–。
本品SP强阳离子交换预装柱是SP强阳离子交换层析填料FF的中压预装柱,规格为5 mL,该预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA等,方便客户操作。
产品性质
基质 |
高度交联的6%琼脂糖微球 |
粒径 |
45-165 µm |
离子交换类型 |
强阳离子 |
载量 |
~0.18-0.25 mmol H+/mL 基质 |
耐压 |
0.3 MPa |
建议流速 |
400-700 cm/h |
pH范围 |
4-13(长期)/ 3-14(短期) |
储存缓冲液 |
20%乙醇,0.2M NaAc |
柱子尺寸 |
1.6×2.5 cm(5 mL) |
运输和保存方法
冰袋运输。2-8℃保存,有效期2年。
使用方法
1 缓冲液的准备
应选择缓冲基团不与介质作用的缓冲盐,平衡缓冲液宜采用低盐和低 pH(通常低于目的物等电点1个 pH 单位)缓冲液以有利于目的物的结合,同时需要考虑目的物在缓冲液中的稳定性。洗脱缓冲液通常为在平衡缓冲液中加入高浓度盐(如 1M NaCl)的缓冲液或高 pH 洗脱。所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。
表1:阳离子交换缓冲液
pH 范围 |
缓冲盐 |
浓度(mM) |
平衡离子 |
pKa(25℃) |
1.4-2.4 |
Maleic acid |
20 |
Na+ |
1.92 |
2.6-3.6 |
Methyl malonic acid |
20 |
Na+或 Li+ |
3.07 |
2.6-3.6 |
Citric acid |
20 |
Na+ |
3.13 |
3.3-4.3 |
Lactic acid |
50 |
Na+ |
3.86 |
3.3-4.3 |
Formic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
3.75 |
3.7-4.7 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
4.21 |
4.3-5.3 |
Acetic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
4.75 |
5.1-6.1 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
5.64 |
5.2-6.2 |
Methyl malonic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
5.76 |
5.6-6.6 |
MJP |
50 |
Na+或 Li+ |
6.27 |
6.7-7.7 |
Phosphate |
50 |
Na+ |
7.20 |
7.0-8.0 |
HEPJP |
50 |
Na+或 Li+ |
7.56 |
7.8-8.8 |
BICINE |
50 |
Cl– |
8.33 |
2 样品准备
样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3 样品纯化
1)将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。
2)用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。
3)使用至少5倍柱床体积的结合Buffer平衡色谱柱。
4)利用泵或注射器上样。
【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。
5)用洗杂Buffer冲洗柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10-15个柱体积)。
6)用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液就足够了。可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。
5 填料清洗
离子交换填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗,然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP(Cleaning In Place)清洗
离子交换填料可以重复使用而无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对填料进行清洗。
1)去除一些沉淀或变性物质
用2倍柱体积的1 M NaOH溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
3)去除一些离子键结合物质
用3-4倍柱体积的2 M NaCl清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。
注意事项
1)请勿冷冻保存本产品。
2)为了得到良好的分离效果,避免缓冲液与层析柱有太大温差变化。
3)层析柱可以放在层析冷柜中使用,但是需要适当降低流速。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5)本产品仅作科研用途!
附表 问题及解决方案
问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
按照【填料清洗】部分对填料进行清洗。 |
样品中含有微小的固体颗粒,建议使用前用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。 |
||
洗脱样品较杂 |
填料重复多次使用 |
按照【填料清洗】部分对填料进行清洗或更换新填料。 |
平衡不充分 |
增加平衡液体积,确保填料充分平衡/洗杂。 |
HB220708
离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。
SP强阳离子交换层析填料FF以高度交联的6%琼脂糖为基架,可耐受较高的流速及更高的化学稳定性,适合实验室及工业大规模纯化。本品带电基团-SO3–。
本品SP强阳离子交换预装柱是SP强阳离子交换层析填料FF的中压预装柱,规格为5 mL,该预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA等,方便客户操作。
产品性质
基质 |
高度交联的6%琼脂糖微球 |
粒径 |
45-165 µm |
离子交换类型 |
强阳离子 |
载量 |
~0.18-0.25 mmol H+/mL 基质 |
耐压 |
0.3 MPa |
建议流速 |
400-700 cm/h |
pH范围 |
4-13(长期)/ 3-14(短期) |
储存缓冲液 |
20%乙醇,0.2M NaAc |
柱子尺寸 |
1.6×2.5 cm(5 mL) |
运输和保存方法
冰袋运输。2-8℃保存,有效期2年。
使用方法
1 缓冲液的准备
应选择缓冲基团不与介质作用的缓冲盐,平衡缓冲液宜采用低盐和低 pH(通常低于目的物等电点1个 pH 单位)缓冲液以有利于目的物的结合,同时需要考虑目的物在缓冲液中的稳定性。洗脱缓冲液通常为在平衡缓冲液中加入高浓度盐(如 1M NaCl)的缓冲液或高 pH 洗脱。所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。
表1:阳离子交换缓冲液
pH 范围 |
缓冲盐 |
浓度(mM) |
平衡离子 |
pKa(25℃) |
1.4-2.4 |
Maleic acid |
20 |
Na+ |
1.92 |
2.6-3.6 |
Methyl malonic acid |
20 |
Na+或 Li+ |
3.07 |
2.6-3.6 |
Citric acid |
20 |
Na+ |
3.13 |
3.3-4.3 |
Lactic acid |
50 |
Na+ |
3.86 |
3.3-4.3 |
Formic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
3.75 |
3.7-4.7 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
4.21 |
4.3-5.3 |
Acetic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
4.75 |
5.1-6.1 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
5.64 |
5.2-6.2 |
Methyl malonic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
5.76 |
5.6-6.6 |
MJP |
50 |
Na+或 Li+ |
6.27 |
6.7-7.7 |
Phosphate |
50 |
Na+ |
7.20 |
7.0-8.0 |
HEPJP |
50 |
Na+或 Li+ |
7.56 |
7.8-8.8 |
BICINE |
50 |
Cl– |
8.33 |
2 样品准备
样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3 样品纯化
1)将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。
2)用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。
3)使用至少5倍柱床体积的结合Buffer平衡色谱柱。
4)利用泵或注射器上样。
【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。
5)用洗杂Buffer冲洗柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10-15个柱体积)。
6)用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液就足够了。可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。
5 填料清洗
离子交换填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗,然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP(Cleaning In Place)清洗
离子交换填料可以重复使用而无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对填料进行清洗。
1)去除一些沉淀或变性物质
用2倍柱体积的1 M NaOH溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
3)去除一些离子键结合物质
用3-4倍柱体积的2 M NaCl清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。
注意事项
1)请勿冷冻保存本产品。
2)为了得到良好的分离效果,避免缓冲液与层析柱有太大温差变化。
3)层析柱可以放在层析冷柜中使用,但是需要适当降低流速。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5)本产品仅作科研用途!
附表 问题及解决方案
问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
按照【填料清洗】部分对填料进行清洗。 |
样品中含有微小的固体颗粒,建议使用前用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。 |
||
洗脱样品较杂 |
填料重复多次使用 |
按照【填料清洗】部分对填料进行清洗或更换新填料。 |
平衡不充分 |
增加平衡液体积,确保填料充分平衡/洗杂。 |
HB220708
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