CM 6FF弱阳离子交换预装柱1mL

CM 6FF弱阳离子交换预装柱1mL

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。

CM弱阳离子交换层析填料FF以高度交联的6%琼脂糖为基架,可耐受较高的流速及更高的化学稳定性,适合实验室及工业大规模纯化。本品带电基团-O-CH2COO

本品CM弱阳离子交换预装柱是CM弱阳离子交换层析填料FF的中压预装柱,规格为1 mL,该预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA等,方便客户操作。

 

产品性质

基质

高度交联的6%琼脂糖微球

粒径

45-165 µm

离子交换类型

弱阳离子

载量

~0.09-0.13 mmol H+/mL 基质

耐压

0.3 MPa

建议流速

300-600 cm/h

pH范围

4-13(长期)/ 2-14(短期)

储存缓冲液

20%乙醇

柱子尺寸

0.7×2.5 cm(1 mL)

 

运输和保存方法

冰袋运输。2-8℃保存,有效期2年。

 

使用方法

1 缓冲液的准备

应选择缓冲基团不与介质作用的缓冲盐,平衡缓冲液宜采用低盐和低 pH(通常低于目的物等电点 1 个 pH 单位)缓冲液以有利于目的物的结合,同时需要考虑目的物在缓冲液中的稳定性。洗脱缓冲液通常为在平衡缓冲液中加入高浓度盐(如 1M NaCl)的缓冲液或高 pH 洗脱。所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。

表1:阳离子交换缓冲液

pH 范围

缓冲盐

浓度(mM)

平衡离子

pKa(25℃)

1.4-2.4

Maleic acid

20

Na+

1.92

2.6-3.6

Methyl malonic acid

20

Na+或 Li+

3.07

2.6-3.6

Citric acid

20

Na+

3.13

3.3-4.3

Lactic acid

50

Na+

3.86

3.3-4.3

Formic acid

50

Na+或 Li+

3.75

3.7-4.7

Succinic acid

50

Na+

4.21

4.3-5.3

Acetic acid

50

Na+或 Li+

4.75

5.1-6.1

Succinic acid

50

Na+

5.64

5.2-6.2

Methyl malonic acid

50

Na+或 Li+

5.76

5.6-6.6

MJP

50

Na+或 Li+

6.27

6.7-7.7

PhoCMhate

50

Na+

7.20

7.0-8.0

HEPJP

50

Na+或 Li+

7.56

7.8-8.8

BICINE

50

Cl

8.33

 

2 样品准备

样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3 样品纯化

1)将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。

2)用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。

3)使用至少5倍柱床体积的结合Buffer平衡色谱柱。

4)利用泵或注射器上样。

【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

5)用洗杂Buffer冲洗柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10-15个柱体积)。

6)用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液就足够了。可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

5 填料清洗

离子交换填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗,然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。

CIP(Cleaning In Place)清洗

离子交换填料可以重复使用而无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对填料进行清洗。

1)去除一些沉淀或变性物质

用2倍柱体积的1 M NaOH溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。

2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。

3)去除一些离子键结合物质

用3-4倍柱体积的2 M NaCl清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。

 

注意事项

1)请勿冷冻保存本产品。

2)为了得到良好的分离效果,避免缓冲液与层析柱有太大温差变化。

3)层析柱可以放在层析冷柜中使用,但是需要适当降低流速。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

5本产品仅作科研用途!

 

附表 问题及解决方案

问题

可能原因

推荐解决方案

柱子反压过高

填料被堵塞

按照【填料清洗】部分对填料进行清洗。

样品中含有微小的固体颗粒,建议使用前用0.22 µm或0.45   µm滤膜过滤。

洗脱样品较杂

填料重复多次使用

按照【填料清洗】部分对填料进行清洗或更换新填料。

平衡不充分

增加平衡液体积,确保填料充分平衡/洗杂。

 

HB220708

 

CM 6FF弱阳离子交换预装柱1mL

暂无内容

CM 6FF弱阳离子交换预装柱1mL

暂无内容

 

离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。

CM弱阳离子交换层析填料FF以高度交联的6%琼脂糖为基架,可耐受较高的流速及更高的化学稳定性,适合实验室及工业大规模纯化。本品带电基团-O-CH2COO

本品CM弱阳离子交换预装柱是CM弱阳离子交换层析填料FF的中压预装柱,规格为1 mL,该预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA等,方便客户操作。

 

产品性质

基质

高度交联的6%琼脂糖微球

粒径

45-165 µm

离子交换类型

弱阳离子

载量

~0.09-0.13 mmol H+/mL 基质

耐压

0.3 MPa

建议流速

300-600 cm/h

pH范围

4-13(长期)/ 2-14(短期)

储存缓冲液

20%乙醇

柱子尺寸

0.7×2.5 cm(1 mL)

 

运输和保存方法

冰袋运输。2-8℃保存,有效期2年。

 

使用方法

1 缓冲液的准备

应选择缓冲基团不与介质作用的缓冲盐,平衡缓冲液宜采用低盐和低 pH(通常低于目的物等电点 1 个 pH 单位)缓冲液以有利于目的物的结合,同时需要考虑目的物在缓冲液中的稳定性。洗脱缓冲液通常为在平衡缓冲液中加入高浓度盐(如 1M NaCl)的缓冲液或高 pH 洗脱。所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。

表1:阳离子交换缓冲液

pH 范围

缓冲盐

浓度(mM)

平衡离子

pKa(25℃)

1.4-2.4

Maleic acid

20

Na+

1.92

2.6-3.6

Methyl malonic acid

20

Na+或 Li+

3.07

2.6-3.6

Citric acid

20

Na+

3.13

3.3-4.3

Lactic acid

50

Na+

3.86

3.3-4.3

Formic acid

50

Na+或 Li+

3.75

3.7-4.7

Succinic acid

50

Na+

4.21

4.3-5.3

Acetic acid

50

Na+或 Li+

4.75

5.1-6.1

Succinic acid

50

Na+

5.64

5.2-6.2

Methyl malonic acid

50

Na+或 Li+

5.76

5.6-6.6

MJP

50

Na+或 Li+

6.27

6.7-7.7

PhoCMhate

50

Na+

7.20

7.0-8.0

HEPJP

50

Na+或 Li+

7.56

7.8-8.8

BICINE

50

Cl

8.33

 

2 样品准备

样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3 样品纯化

1)将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。

2)用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。

3)使用至少5倍柱床体积的结合Buffer平衡色谱柱。

4)利用泵或注射器上样。

【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

5)用洗杂Buffer冲洗柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10-15个柱体积)。

6)用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液就足够了。可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

5 填料清洗

离子交换填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗,然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。

CIP(Cleaning In Place)清洗

离子交换填料可以重复使用而无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对填料进行清洗。

1)去除一些沉淀或变性物质

用2倍柱体积的1 M NaOH溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。

2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。

3)去除一些离子键结合物质

用3-4倍柱体积的2 M NaCl清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。

 

注意事项

1)请勿冷冻保存本产品。

2)为了得到良好的分离效果,避免缓冲液与层析柱有太大温差变化。

3)层析柱可以放在层析冷柜中使用,但是需要适当降低流速。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

5本产品仅作科研用途!

 

附表 问题及解决方案

问题

可能原因

推荐解决方案

柱子反压过高

填料被堵塞

按照【填料清洗】部分对填料进行清洗。

样品中含有微小的固体颗粒,建议使用前用0.22 µm或0.45   µm滤膜过滤。

洗脱样品较杂

填料重复多次使用

按照【填料清洗】部分对填料进行清洗或更换新填料。

平衡不充分

增加平衡液体积,确保填料充分平衡/洗杂。

 

HB220708

 

CM 6FF弱阳离子交换预装柱1mL

暂无内容

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暂无内容