红色荧光标记人源低密度脂蛋白 Human DiI-LDL|Human DiI-Low Density Lipoprotein
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产品描述
低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein,简称为LDL)是通过脂蛋白酯酶的水解作用,脱去极低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三脂,释放游离脂肪酸转化而来的。因甘油三酯的去除使得胆固醇所占比例提高,增加颗粒本身密度,从而得到LDL。LDL与脊椎细胞表面的受体特异性结合,然后通过受体介导的内吞作用将胆固醇运输到全身各处细胞。因此,LDL可以用来研究受体介导的内吞作用过程,尤其是在动脉粥样硬化等疾病中,血浆来源的LDL还可用于研究LDL在功能和代谢中的氧化作用。
红色荧光标记人源低密度脂蛋白(Human DiI-LDL)是标记荧光探针Dil(1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate)的LDL,可以用来观察培养细胞的LDL结合位点,或筛选LDL受体表达缺陷型细胞突变株。也可以通过流式细胞术评估细胞受体水平,或检测组织内的受体水平。 DiI-LDL是研究细胞内吞作用非常好的标记物。
翌圣提供的Human DiI-LDL为无菌包装,可以直接稀释使用。除提供DiI-LDL,我们还提供不带标记的LDL,以及修饰化的LDL如乙酰化LDL(Ac-LDL),以及氧化修饰的LDL(Ox-LDL)。
制备方法
纯化的人健康血浆来源的LDL直接标记上DiI荧光探针,然后通过超速离心以及透析的方法纯化回收标记产物,并滤膜过滤除菌。纯化的DiI-LDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS,pH 7.4中。
产品性质
浓度(Concentration) |
0.8-3.0 mg/ml |
外观(Appearance) |
乳状液体 |
吸光度比例(Absorbance Ratio) |
Dil/Protein=555nm/275nm=1.30 |
缓冲液组分(Buffer Components) |
0.02 mM EDTA in PBS, pH 7.4 |
运输与保存方法
冰袋运输;4ºC无菌避光,收到货后可稳定保存6周。千万不可冻存!使用时一定要无菌操作!
注意事项
1)本品的稀释工作液极不稳定,建议即配即用;
2)长期贮存可能会有沉淀析出,属于正常现象,低速离心2 min去除沉淀即可使用;
3)LDL与LDL受体的结合需要Ca2+和Mn2+的参与,过量EDTA的存在会抑制其结合;
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操。
5) 本产品仅作科研用途!
操作步骤
1)工作液制备:无菌条件下,将DiI-LDL用细胞培养基稀释至20-40 µg/ml。
2)细胞准备:吸除培养板内培养基,向活细胞内加入上述LDL,37℃培养4-5小时。
3)孵育结束,吸去含有Human DiI-Ox-LDL的培养基,并用无探针的培养基洗几次。
4)根据实验需求用荧光显微镜或流式细胞仪检测。
a)荧光显微镜观察
采用标准的罗丹明激发:发射滤光片(或建议使用波长为:Ex/Em=549nm/565nm);若需要请使用含3%甲醛的PBS进行固定,切勿使用甲醇或丙酮固定,因Dil易溶于有机溶剂。注:需设阳性细胞以做对照。
b)细胞分选(流式细胞术)
胰蛋白酶处理细胞或者加入EDTA制成单细胞悬液,选用合适的已标记纯化细胞用作阴性和阳性对照,从而进行流式分选设门(gate)。(建议使用波长为Ex: 488/514/549nm; Em: 565nm)。
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红色荧光标记人源低密度脂蛋白(Human DiI-LDL)是标记荧光探针Dil(1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate)的LDL,可以用来观察培养细胞的LDL结合位点,或筛选LDL受体表达缺陷型细胞突变株。也可以通过流式细胞术评估细胞受体水平,或检测组织内的受体水平。 DiI-LDL是研究细胞内吞作用非常好的标记物。
翌圣提供的Human DiI-LDL为无菌包装,可以直接稀释使用。除提供DiI-LDL,我们还提供不带标记的LDL,以及修饰化的LDL如乙酰化LDL(Ac-LDL),以及氧化修饰的LDL(Ox-LDL)。
制备方法
纯化的人健康血浆来源的LDL直接标记上DiI荧光探针,然后通过超速离心以及透析的方法纯化回收标记产物,并滤膜过滤除菌。纯化的DiI-LDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS,pH 7.4中。
产品性质
浓度(Concentration) |
0.8-3.0 mg/ml |
外观(Appearance) |
乳状液体 |
吸光度比例(Absorbance Ratio) |
Dil/Protein=555nm/275nm=1.30 |
缓冲液组分(Buffer Components) |
0.02 mM EDTA in PBS, pH 7.4 |
运输与保存方法
冰袋运输;4ºC无菌避光,收到货后可稳定保存6周。千万不可冻存!使用时一定要无菌操作!
注意事项
1)本品的稀释工作液极不稳定,建议即配即用;
2)长期贮存可能会有沉淀析出,属于正常现象,低速离心2 min去除沉淀即可使用;
3)LDL与LDL受体的结合需要Ca2+和Mn2+的参与,过量EDTA的存在会抑制其结合;
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操。
5) 本产品仅作科研用途!
操作步骤
1)工作液制备:无菌条件下,将DiI-LDL用细胞培养基稀释至20-40 µg/ml。
2)细胞准备:吸除培养板内培养基,向活细胞内加入上述LDL,37℃培养4-5小时。
3)孵育结束,吸去含有Human DiI-Ox-LDL的培养基,并用无探针的培养基洗几次。
4)根据实验需求用荧光显微镜或流式细胞仪检测。
a)荧光显微镜观察
采用标准的罗丹明激发:发射滤光片(或建议使用波长为:Ex/Em=549nm/565nm);若需要请使用含3%甲醛的PBS进行固定,切勿使用甲醇或丙酮固定,因Dil易溶于有机溶剂。注:需设阳性细胞以做对照。
b)细胞分选(流式细胞术)
胰蛋白酶处理细胞或者加入EDTA制成单细胞悬液,选用合适的已标记纯化细胞用作阴性和阳性对照,从而进行流式分选设门(gate)。(建议使用波长为Ex: 488/514/549nm; Em: 565nm)。
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Q:该产品如何储存?
A:4ºC 无菌避光,收到货后可稳定保存 6 周。但不可冻存。
Q:该产品工作液可以储存多久?
A:本品的稀释工作液极不稳定,建议即配即用。
Q:该产品长期保存会出现少量沉淀,还可以使用吗?
A:这是正常现象。低速离心 1 ~2min 去除沉淀物,即得到澄清液。
Q:该产品常用缓冲液是什么?
A:含 0.02 mM EDTA 的 PBS,pH 7.4。
[1] Wang J, Zhao J, Yan C, et al. Identification and evaluation of a lipid-lowering small compound in preclinical models and in a Phase I trial. Cell Metab. 2022;34(5):667-680.e6. doi:10.1016/j.cmet.2022.03.006(IF:27.287)
[2] Heybrock S, Kanerva K, Meng Y, et al. Lysosomal integral membrane protein-2 (LIMP-2/SCARB2) is involved in lysosomal cholesterol export. Nat Commun. 2019;10(1):3521. Published 2019 Aug 6. doi:10.1038/s41467-019-11425-0(IF:11.878)
[3] Ma N, Fan L, Dong Y, et al. New PCSK9 inhibitor miR-552-3p reduces LDL-C via enhancing LDLR in high fat diet-fed mice. Pharmacol Res. 2021;167:105562. doi:10.1016/j.phrs.2021.105562(IF:7.658)
[4] Huang M, Zhao Z, Cao Q, et al. PAQR3 modulates blood cholesterol level by facilitating interaction between LDLR and PCSK9. Metabolism. 2019;94:88-95. doi:10.1016/j.metabol.2019.02.005(IF:6.513)
[5] Wang JQ, Lin ZC, Li LL, et al. SUMOylation of the ubiquitin ligase IDOL decreases LDL receptor levels and is reversed by SENP1. J Biol Chem. 2021;296:100032. doi:10.1074/jbc.RA120.015420(IF:5.157)
[6] Wang D, Yang X, Chen Y, et al. Ascorbic acid enhances low-density lipoprotein receptor expression by suppressing proprotein convertase subtilisin/kexin 9 expression. J Biol Chem. 2020;295(47):15870-15882. doi:10.1074/jbc.RA120.015623(IF:4.238)
[7] Li J, Luo Y, Zhan L, et al. Comprehensive chemical profiling of the flowers of Citrus aurantium L. var. amara Engl. and uncovering the active ingredients of lipid lowering. J Pharm Biomed Anal. 2022;211:114621. doi:10.1016/j.jpba.2022.114621(IF:3.935)