碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific)，即Immunoglobulin-degrading Enzyme from Streptococcus Equi Subspecies Zooepidemicus Protease，也称免疫球蛋白特异性IdeZ蛋白酶，是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种免疫球蛋白IgG降解酶(Immunoglubulin G-degrading enzyme)。

IdeZ Protease具有极高的底物特异性，仅能识别人等特定种属和特定类型的IgG，并在抗体铰链区下方的特定位点进行酶切，使IgG水解为完整的F(ab’)₂片段和Fc片段(参考图1)。IdeZ Protease作为工具酶主要应用于抗体类药物或抗体融合蛋白药物的结构表征分析，制备仅包含F(ab’)₂片段的抗体或抗体的Fc片段，也可用于免疫沉淀后Western检测时去除重链对于目标蛋白检测的干扰等用途。

图1. IdeZ Protease (IgG-specific)用于切割人IgG的效果示意图。IdeZ Protease酶切后，在非还原性和非变性条件下可以产生100kD的F(ab’)₂和50kD的Fc；如果在变性和还原性条件下会产生2个25kD的Fd’片段，2个25kD的LC片段和2个25kD的Fc/2片段。酶切过程中或非酶切过程中都可使用PNGase F (P2318)对抗体进行去糖基化。

IdeZ Protease可有效切割人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，还可以切割兔、大鼠、猴、绵羊(Sheep)、人源化和嵌合的IgG以及Fc融合蛋白，如Enbrel [1]。但IdeZ Protease不能切割小鼠IgG1/IgG2b，猪、牛或山羊IgG，以及非IgG同种型免疫球蛋白，包括IgA、IgM、IgD和IgE。与IdeS Protease相比，IdeZ Protease对大鼠、小鼠IgG2a和IgG3的酶切活性显著提高。

碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific)用于切割人、兔和驴IgG的效果参考图2。

图2. 碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific) (P2526)用于切割人、兔和驴IgG的效果图。在25µl反应体系(50mM Sodium Phosphate (pH7.5 @25℃))中，加入10μg人、兔和驴IgG (A7001/A7016/A7039)，再加入2.5µl的10X Reaction Buffer以及图中指定量的本产品，然后用超纯水补至25µl，37℃孵育30分钟进行酶切。反应结束后，立即65℃孵育10分钟以终止反应。取出10μl反应产物，加入2μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0015F)，进行12%聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色(P0017F BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液)，拍照观察结果。实验结果表明，本产品对人和兔IgG具有明显的切割效果，并且对于兔IgG有非常高的酶活性，但不能特异性识别与切割驴IgG。实际使用效果会因实验条件、实验材料等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific)用于切割大鼠IgG的效果参考图3。

图3. 碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific) (P2526)用于切割大鼠IgG的效果图。在25µl反应体系(50mM Sodium Phosphate (pH7.5 @25℃))中，加入10μg大鼠IgG (A7031)，再加入2.5µl的10X Reaction Buffer以及图中指定量的本产品，然后用超纯水补至25µl，37℃孵育120分钟进行酶切。反应结束后，立即65℃孵育10分钟以终止反应。取出10μl反应产物，加入2μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0015F)，进行12%聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色(P0017F BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液)，拍照观察结果。实验结果表明，本产品能识别并切割大鼠IgG，但酶切效率相对较低，需要增加使用酶量或延长反应时间才能达到充分切割的目的。实际使用效果会因实验条件、实验材料等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

本产品具有良好的酶切活性并含有His标签，在酶切完成后可以使用镍柱很容易地从酶切反应体系中分离去除含有His标签的IdeZ Protease。

分子量：约为33kDa。

用途：抗体类药物或抗体融合蛋白药物的结构表征分析，酶切产生制备仅包含F(ab’)₂片段的抗体或抗体的Fc片段，也可以用于免疫沉淀后Western检测时去除重链对于目标蛋白检测的干扰等用途。

来源：纯化自携带编码IdeZ Protease基因的E.coli重组菌株。

酶活性：IdeZ Protease (IgG-specific) is a recombinant antibody specific protease that recognizes all human, rabbit, rat, sheep and monkey IgG subclasses, cleaving specifically at a single recognition site below the hinge region, to yield a homogenous pool of F(ab’)₂ and Fc fragments. IdeZ Protease (IgG-specific) more effectively cleaves murine IgG2a than IdeS Protease.

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to cleave >95% of 1µg of human IgG, in 15 minutes at 37℃ in a total reaction volume of 10µl.

纯度：经SDS-PAGE检测，纯度大于95%；且不含除IdeZ Protease之外的其它种类蛋白酶，不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。

酶储存液：20mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 1mM EDTA (pH7.5 @25℃)。

IdeZ Protease Dilution Buffer: 20mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 1mM EDTA (pH7.5 @25℃)。

10X Reaction Buffer: 500mM Sodium Phosphate (pH7.5 @25℃)。

失活或抑制：65℃孵育10分钟，可使IdeZ Protease失活。

包装清单：

保存条件：

-20℃保存，两年有效。避免反复冻融，建议首次使用时适当分装后冻存使用。

注意事项：

IdeZ Protease使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

IdeZ Protease对不同物种IgG的酶切效率存在较大差异，酶切特定物种的IgG时，建议适当摸索反应孵育时间和使用酶量。IdeZ Protease对小鼠IgG2a和IgG3的切割效率偏低，建议增加IdeZ Protease的使用量(建议5倍至10倍作为起点)或延长反应孵育时间(2小时至过夜)以实现对小鼠IgG2a和IgG3的充分酶切。

IdeZ Protease在中性pH或接近中性pH的缓冲体系中活性最强，且酶切体系中盐浓度不宜过高，推荐使用本产品提供的10X Reaction Buffer进行酶切反应。在使用pH6-8范围以外的缓冲液(例如醋酸盐缓冲液)时，孵育时间或酶量需要根据实际情况进行优化。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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