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产品名称 |
货号 |
规格 |
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价格(元) |
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EZ Trans细胞转染液 |
C4058L1080 |
1mL |
4℃ |
200 |
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EZ Trans细胞转染液 |
C4058L1082 |
50mL |
4℃ |
1800 |
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EZ Trans细胞转染液 |
C4058L1084 |
500mL |
4℃ |
3500 |
产品描述：
细胞转染液（核心成分为线性聚乙烯亚胺，也称作LPEI），是新一代的转染试剂，带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团 形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过胞吞作用进入细胞。除了具有阳离子脂质体（如：Lipo2000,3000）的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点。
EZ Trans是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔二个碳个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体。其转染性能好于树枝状聚合物，而且它的细胞毒性低。
使用方法：
瞬时转染方法
1. 接种细胞：转染前一天，用胶原酶消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。
2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、EZ Trans 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据下表所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释EZ Trans 试剂。每 1 μg DNA 需用2-5 μL EZ Trans转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的EZ Trans转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 Falcon 5 mL /14 mL 离心管。
3. 转染细胞：直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染 3 h 后，添加1/2体积的包含 30%血清的生长培养基。
4. 孵育细胞和分析结果：在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后zui快 7h 即可检测到转入基因的表达。请自行确定检测时间。?
稳定转染方法
1. 接种细胞：转染前一天，用胰酶消化细胞并计数。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，总体积如表 1 所示，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。
2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用2-5 μL EZ Trans转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的EZ Trans转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 Falcon 5 mL /14 mL 离心管。
3. 转染细胞：直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染 3 h 后，添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。
4. 孵育细胞和分析结果：在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后zui快 7h 即可检测到转入基因的表达。
5.转染 24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释 10 倍以上），在 CO2培养箱中 37℃孵育隔天。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
运输与保存方法：
常温运输，4℃保存，保质期12个月。
使用注意事项:
质粒质量：请务必使用高质量转染级无内毒素质粒。通过 260 nm 光吸收测定 DNA 浓度，260 nm / 280 nm 比值确定 DNA 纯度（比值应该在 1.8~2.0 的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。
细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者李记生物的胎牛血清培养细胞。?
特别提醒:
1. 对于某些类型的细胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 细胞，在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为 70~80%。
2. 对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。
3. 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是 DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。
4. 对大多数细胞来而言，每 1 μg DNA 使用 3.0 μLEndoFectinTM 试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每 1 μg DNA 使用 1~4 μL 体积线性PEI转染试剂进行优化。
附：几种细胞转染方法比较
几种细胞转染方法（试剂）特点比较表
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转染方法 |
原理 |
主要应用 |
特点 |
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阳离子聚合物 |
带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团 形成带正电的 复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过胞吞作用进入细胞。 |
稳定转染 瞬时转染 所有细胞 |
除了具有阳离子脂质体的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点，是新一代的转染试剂。 |
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阳离子脂质体法 |
带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物，然后脂质体上剩余的电核与细胞膜上的唾液酸残基的负电 核结合；另一种解释是通过细胞是内吞作用而被进入细胞。(若DNA浓度过高，中和脂质体表面电核，而降低了与细胞的结合能力) |
稳定转染 瞬时转染 所有细胞 |
使用方法简单，可携带大片段DNA，通用于各种类型的裸露DNA或RNA，能转 染各种类型的细胞，没有免疫原性。虽在体外基因转染 中有很高的效率，但在体 内，能被血清清除，并在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，导致高水平的毒性，这在很大程度上限制了 其应用 |
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DEAE-葡聚糖法 |
带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞 |
瞬时转染 |
相对简便、重复比磷酸钙好,但对细胞有一定的毒副 作用,转染时需除血清且一 般只用于BSC-1,CV-1,COS 细胞系 |
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磷酸钙法 |
磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞 |
稳定转染 染瞬转染 |
不适用于原代细胞（所需的DNA浓度较高）,操作简 便但重复性差,有些细胞不 适用 细胞建议用CSCL梯度离心，转染是拷贝数较多 |
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逆转录病毒(RNA) |
通过病毒中膜糖蛋白和宿主细胞表面的受 体相互作用而 进入宿主细胞，之后反转入酶 启动合成DNA并随机整合到宿主基因组中 |
稳定转染 特定宿主细胞 |
可用于难转染的细胞、原代细胞，体内细胞等,但携 带基因不能太大（<8kb）, 细胞需处分裂期,需考虑安 全因素 |
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腺病毒 (双链 DNA) |
先和细胞表面 的受体结合，继 而在αv整合 素介导下被细 胞内吞 |
瞬时转染 特定宿主细胞 |
可用于难转染的细胞,需考虑安全因素 |
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Biolistic颗粒传递法 （基因枪粒子轰击法） |
将DNA用显微重金属颗粒沉 淀，再将包被好 的颗粒用弹道 装置投射入细 胞，DNA在胞内逐步释放，表达 |
瞬时性转染 稳定转染 |
可用于：人的表皮细胞， 纤维原细胞，淋巴细胞系以 及原代细胞 |
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显微注射法 |
用显微操作将 DNA直接注入靶 细胞核 |
稳定转染 瞬时转染 |
转染细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的 胚胎细胞 |
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电穿孔法 |
高脉冲电压破 坏细胞膜电位，DNA通过膜上形 成的小孔导入 |
稳定转染 瞬时转染 所有细胞 |
适用性广，除了质粒外，还可转染大的基因组 （>65kb）但细胞致死率高， DNA和细胞用量大， 需根 据不同细胞类型优化电穿 孔实验条件，拷贝数较少 1-20 |