kamiyabiomedical KT-470*
Mouse Cardiac Troponin-I ELISA
小鼠心肌肌钙蛋白-I酶联免疫吸附试验
用于小鼠血浆肌钙蛋白I的定量测定。
货号 KT-470
仅供研究使用
产品信息
小鼠心肌肌钙蛋白-I酶联免疫吸附试验
猫。KT-470号
产品
K-分析小鼠心肌肌钙蛋白-I酶联免疫吸附试验是一种酶免疫分析法，用于定量测定心肌
小鼠血浆肌钙蛋白-I。仅供研究使用。
介绍
心肌肌钙蛋白-I（ctni）是调节肌肉收缩的肌钙蛋白复合物的组成部分。心脏损伤后，CTNI
被释放到血液中。因为它在心脏中有特殊的表达，所以它是心脏损伤的一个*的生物标志物。在
人CTNI水平在受伤后12-24小时达到峰值，2-6天内恢复到基线水平。在小鼠中，水平早在1
1-3天内恢复正常。
原理
本试验用于血浆样品。酶联免疫吸附试验使用两种不同的抗体，它们识别相对
CTNI上的蛋白酶抗性表位。一种用于固相固定（微量滴定井）。第二个是共轭的
对辣根过氧化物酶（HRP）进行检测。首先用三体积的血浆稀释血浆样品。
稀释剂。然后将校准器和稀释样品与HRP共轭物在微量滴定池中培养1小时。这个
结果CTNI分子夹在固定和检测抗体之间。洗井到
去除未结合的HRP共轭物。加入TMB，孵育20分钟。如果存在CTNI，则形成蓝色。颜色
通过添加停止溶液停止显影，将颜色变为黄色，并在450 nm处测量吸光度。
CTNI的浓度与吸光度成正比，由校准曲线得出。
组件
•防CTNI涂层板（12 x 8孔条）
•CTNI库存校准器（冻干）
•校准器稀释剂，25毫升
•血浆稀释剂，25 ml
•HRP共轭物，11 ml
•20倍洗涤液，50毫升
•TMB溶液，11毫升
•停止溶液，11毫升
所需但未提供的材料
•移液器和吸管头
•蒸馏水或去离子水
•聚丙烯或玻璃管
•涡流搅拌机
•吸水纸或纸巾
•培养皿/摇床
•板垫圈
•能够测量450 nm吸光度的读板器。
•曲线拟合软件
洗涤液准备
洗涤液作为20倍的储备提供。使用前，用950毫升蒸馏水稀释瓶子（50毫升）的内容物。
或去离子水。
校准器准备
1。按照小瓶标签上的详细说明，用去离子水或蒸馏水重新配制冻干的CTNI储备。轻轻搅拌直到溶解的
2。将7根聚丙烯管标记为10、5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 ng/ml。
三。在标记为10 ng/ml的试管中，移液管446.1微升校准稀释液。然后加入53.9μl的原料，轻轻搅拌。这个
提供10 ng/ml校准仪。
4。用移液管将250微升校准稀释液移入标有5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 ng/ml的试管中。
5。通过将250μl的10 ng/ml校准器与250μl的稀释剂在管中稀释和混合，制备5 ng/ml校准器。
标记为5 ng/ml。同样，通过两倍串联稀释准备剩余的校准仪。
重组后的CTNI储备应在使用后立即冷冻。冷冻时保持稳定或至少1
-20°C时为一个月，-70°C时为6个月。使用后丢弃工作校准仪。
样品采集与制备
血浆（EDTA、柠檬酸盐或肝素）应在血液采集后尽快制备，并在4°C下保存。
应同样处理样品（即所有样品的储存时间和温度应相同）。中频等离子体
样品不能在采集后4小时内进行分析，应在-70°C下冷冻，使用前仅解冻一次。
我们建议对样品进行一式两份的分析。分析前，血浆样品应稀释四倍
血浆稀释剂。这可以很容易地通过将100μl的每个血浆样品与300μl的血浆稀释剂混合
聚丙烯微型离心管。
一般说明
1。所有试剂在使用前应达到室温。
2。解冻后，校准器稀释剂中可能会出现沉淀物。应通过离心法去除沉淀物。
在台式离心机中以约3000转/分的转速运行5分钟。使用干净的上清液。
三。在*理解
指导并遵守良好的实验室惯例。
4。清洗程序至关重要。洗涤不足将导致精度差和吸光度读数错误升高。
5。实验室温度会影响吸光度读数。我们的酶联免疫吸附测定试剂盒是用设置在
150转/分和25°C。在较低温度下进行分析会导致吸光度值较低。
测定程序
1。将所需数量的8孔条固定在支架中。未使用的板条应存放在重新密封的袋子中
4°C的干燥剂，以备将来使用。
2。在每个孔中添加100μl的HRP共轭物。
三。向井中注入100微升校准仪和稀释样品（我们建议校准仪和样品试运行
复制品）。
4。在150转/分和25°C的摇板机上培养1小时。
5。使用平板垫圈（400μl/孔）排空并用1X洗涤液清洗5个微量滴度孔。
6。在吸水纸或纸巾上用力敲打油井，清除所有残留的液滴。
7。向每个孔中分配100μl TMB。
8。在150转/分和25°C的轨道式微型平板振动筛上培养20分钟。
9。20分钟后，通过向每个孔中添加100μl的停止溶液来停止反应。
10。轻轻混合。务必确保所有蓝色变为黄色。
11。在5分钟内用平板阅读器读取450纳米的吸光度。
计算结果
1。使用曲线拟合软件，通过绘制校准器的吸光度值与对数10的关系来构建校准曲线。
浓度。
2。将校准曲线拟合为四参数逻辑回归（4pl）方程（x轴=log10浓度），并确定
样品的浓度（导出反对数）。
三。将导出浓度乘以稀释系数，以确定原始样品中的实际浓度。
4。如果A450值超出校准曲线，应适当稀释样品并重新测试。如果进一步稀释
需要时，新鲜解冻的血浆样品应先用三体积的血浆稀释剂（4倍稀释）稀释。这个
然后用校准器稀释剂稀释所得混合物。
典型校准曲线
典型的校准曲线如下所示。这只是为了说明。必须为每个实验生成校准曲线。
存储
将冻干后的原料储存在-20°C或以下。试剂盒的剩余部分应储存在4°C，微量滴定板应
放在装有干燥剂的密封袋中。自购买之日起，套件将保持稳定6个月。