该cDNA文库(质粒DNA)是由啤酒酵母S288C衍生的poly(A)+ RNA在对数期通过Linker-Primer方法(参考文献1)由大阪H. Nojima教授构建的。大学。通过使用寡核苷酸(dT)18接头引物单向克隆该文库,该引物包含Not I和BamHI(Bgl II)-Sma I衔接子的限制性酶切位点。 该文库中使用的pLZ3载体(如下所示)不能在啤酒酵母中复制,但包含pUCori以便在大肠杆菌中复制。
应用 已知或未知基因的PCR筛选:准备已知或未知基因(cDNA)的引物并扩增通过从该文库中PCR克隆该基因,然后克隆至合适的载体。 标准扩增条件:以10-100 ng cDNA为模板,进行35个PCR反应循环。(根据目标基因的mRNA的表达率来改变模板的数量和循环数。)
规格 数量:在10 mM Tris-HCl-1mM EDTA(pH 7.5)中,500 ng(40 ng / ul 13ul) 质量:1)独立克隆的数量:3.6 x 106 2)平均插入片段大小:大于1 kb 存储:-20℃
参考文献 1. KoboriM。池田 奈良 加藤 久米川 野岛 和川岛 “通过改进的方法大规模分离破骨细胞特异性基因,涉及制备减法cDNA文库。” Genes Cells 3:459-475(1998)PMID:9753427 2.田中S。和野岛 “ Nik1:酿酒酵母的Nim1样蛋白激酶与Cdc28复合物相互作用并调节细胞周期进程。” Genes Cells 1 905-921(1996)PMID:9077450 3. SambrookJ。和RussellDW。分子克隆第11章“ cDNA文库的制备和基因鉴定”。CSHL出版社(2001)
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