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LowCross-Buffer®使用常见问题及解答

1. LowCross-Buffer®具体是什么?

LowCross Buffer®是一种样品/抗体缓冲液，用于免疫分析（如ELISA、Western blotting、蛋白质阵列和免疫PCR）。它有助于消除干扰。干扰如非特异性结合、交叉反应和基质效应。抗体和抗原之间的高亲和力结合不会受到负面影响，而抗体的不必要结合会受到抑制。

2. LowCross-Buffer®为什么能减少基质效应?

大多数所谓的基质效应都是基于基质成分（如人血清样本中的血清蛋白）与待测物或抗体之间不需要的低或中亲和力结合。

待测物可能会被样本中的蛋白质或其他成分所掩盖，从而导致抗体不能与待测物结合。此外，基质成分也可能会掩盖抗体。LowCross Buffer®减少了抗体的掩蔽。

3. LowCross-Buffer®该怎样使用?

LowCross Buffer®是用于标本（如血清或血浆）和/或检测抗体的稀释缓冲液。这取决于实验干扰。如果干扰如非特异性结合或交叉反应来自检测抗体，我们建议在LowCross Buffer®中稀释检测抗体。

4. LowCross-Buffer®需要稀释使用吗?

不用。LowCross-Buffer®为即用型，

样本或检测抗体可直接用这个缓冲液稀释。只有在竞争性分析或者某些应用如免疫组织化学中，可以用水货PBS稀释 LowCross-Buffer®后使用。在这种情况 下，用户需通过测试找到理想的混合比。

5. LowCross-Buffer®可以与单克隆或多克隆抗体一起使用吗?

可以。但如果你使用多克隆抗体，需注意多克隆抗体组成中含有许多不同亲和力的抗体，LowCross-Buffer®仅允许高亲和力结合，而低亲和力和重亲和力结合则会减少。如果使用LowCross-Buffer®，可能需要适度增加多克隆检测抗体的浓度。抗体浓度的增加也会增加高亲和力抗体的浓度。而LowCross-Buffer®可以抑制低亲和力和中亲和力抗体的结合。

是否必须增加抗体的浓度取决于抗体的质量。

6. LowCross-Buffer®缓冲液的组分是否会影响酶法检测的显色反应?

LowCross-Buffer®不会对碱性磷酸酶或过氧化物酶的酶活性产生负面影响。有时用户使用LowCross-Buffer®孵育标记的抗体可以增加酶活性。

7. 采用过氧化物酶标记二抗进行检测的夹心法ELISA，实验结果出现背景的情况，这是什么原因导致的呢？使用LowCross-Buffer®是否会有帮助?

重要的是要知道二抗是否经其他哺乳动物的抗体预吸附处理。抗兔IgG的二抗也可与小鼠IgG或山羊IgG发生高亲和力的交叉反应，除非针对这些物种的抗体进行纯化。原因是哺乳动物抗体序列同源性高。二抗通常不纯化（预吸附），因此会发生高亲和力的交叉反应。在这种情况下，使用LowCross Buffer®没有帮助。二抗必须更换成不与包被抗体发生交叉反应的预吸附的抗体。

8. LowCross Buffer®是否可以与荧光染料结合使用，譬如在蛋白分析中？

可以。蛋白分析中会带来积极的实验结果。

在某些使用青色染料（例如Cy5、Cy3、Oyster-dyes) 应用中，结合LowCross Buffer®使用可以观察到荧光信号增强。

9. LowCross-Buffer®能否多次冻融?

LowCross-Buffer®可经数次冻融，但重要的是在使用前需将该缓冲液充分混合。

10. LowCross-Buffer®能否替代如Western blotting膜、ELISA板的表面封闭剂?

不可以! LowCross-Buffer®不是表面封闭剂，你可以用她稀释样本或抗体。对于封闭，我们建议使用The Blocking Solution。这款封闭剂的封闭效果比市面上大多数封闭剂的要更优。

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