DynaCompetent® 细胞 IS 突变安全

（旧产品名称：LowInSeq）

基因组中 DNA 型转座因子 (IS) 活性降低的大肠杆菌感受态细胞。您可以确保准备好质粒。可用于克隆对大肠杆菌造成负担的大型构建体。

*本产品由 Biopalette Co., Ltd. 的专技术 Target-AID® 开发。

DynaCompetent® Cells IS-mutation Safe

本产品以DH5α为原株，在大肠杆菌基因组中ISs之间的IS2、IS5、IS10、ISEc63（相似序列）的转座酶翻译区使用Target-AID®终止密码子。 大肠杆菌感受态细胞* 1

* 1虽然 IS 的活性降低，但不保证 IS 不会转移。

确认 IS 插入

质粒的频率降低 用耐氨苄青霉s质粒 (30 kb, pUC Ori) 转化本产品和大肠杆菌 DH5α 菌株后，进行 24 小时液体培养，最多进行 6 次继代培养。在上述每次培养过程中纯化质粒，

并使用HiSeq进行下一代测序以估计插入IS * 2 * 3, 4的质粒的大致比例。

该产品抑制了 IS 插入 DH5α 菌株的质粒。

* 2 IS：IS1、IS2、IS3、IS4、IS5、IS10、IS30、ISEc5、IS609、ISEc63的总数。

* 3 DH5α菌株在+6次传代培养时计算为超过100%，这表明两个或多个IS插入到一个质粒中。

* 4单独将相同质粒插入DH5α菌株，传代6次后分离出9个克隆，进行Sanger测序，证实了高IS插入率。

上述质粒用BamHI消化并进行琼脂糖凝胶电泳。该质粒中有2个BamHI位点，原本产生2个条带，但通过重复传代次数确认了在DH5α株中条带模式发生了变化。建议将 IS 插入质粒。另一方面，用该产物传代的质粒抑制了条带模式的变化。

DH5α

GFP 荧光在 48.6% 的菌落中消失或减弱

IS-突变安全

GFP 荧光没有消失或衰减（没有 IS 插入）*5

将该产物和大肠杆菌DH5α菌株用具有在lac启动子控制下的GFP的质粒（不同于上述“减少的IS插入质粒”图和迁移图的质粒）转化。将得到的菌落液体培养18小时，再传代6次。继代培养后，将培养液涂布在LB平板上培养过夜。在获得的菌落中观察到GFP的荧光。

结果，在DH5α中出现的48.6%的菌落中，GFP的荧光消失或减弱，但在该产物中，没有确认其中GFP的荧光消失或减弱的菌落。当从DH5α菌株中GFP荧光消失或减弱的菌落中提取质粒并测序时，所有克隆均在lac启动子，或DNA型转座因子IS2或在lac启动子与GFP基因之间插入IS10L。

另一方面，在该产品和来自荧光DH5α菌落的质粒中，从lac启动子到GFP的区域被完整地保留。

通过继代培养，DH5α产生了质粒因插入IS而受损的克隆，但证实该产物抑制了IS对质粒的损伤。

* 5使用本产品，即使是完整的质粒，在 LB 板上观察到的 GFP 的荧光强度也低于 DH5α 的荧光强度（它具有可见荧光）。在该产品中，在 lac 启动子控制下的 GFP 的表达水平可能低于 DH5α。然而，质粒被克隆和纯化没有任何问题。

• 转化效率：> 1 x 10 8 CFU / μg (pUC19)

• 附有 10 × 1 ml SOC 培养基

• 不适用于卡塔赫纳法规