内质网红色荧光探针(活细胞) 活细胞内质网荧光探针|ER-Tracker Red(BODIPY® TR Glibenclamide),for live-cell imaging
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产品描述
ER-Tracker探针是一系列具有细胞膜透过性，对活细胞内质网具有高度选择性的探针，不像传统的DiOC6(3)，该系列探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。使用以下提供的优化步骤对活细胞染色后用醛固定，可以部分保留活细胞的染色特征。
本品为，由红色荧光染料BODIPY® TR和 Glibenclamide 偶联而成，其Ex= 587 nm，Em= 615 nm。格列本脲（Glibenclamide, glyburide），一种常用降血糖药物，在胰岛β细胞、胰岛素的分泌、心肌衰竭细胞功能以及心律不齐的研究等方面具有重要科研用途。格列本脲高度结合ATP-敏感型K+通道的磺脲受体，且本受体富集存在内质网上，因此适合用作内质网荧光探针。
本品为溶于DMSO的1 mMER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide)储存液，推荐工作浓度为～1 μM。
产品性质
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分子式（Formula） |
C44H42BClF2N6O7S2 |
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分子量（Molecular Weight） |
915.23 |
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外观（Appearance） |
液体 |
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Ex/Em |
587/615 nm |
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滤片（Filter） |
TRITC |
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结构式（Structure） |
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运输和保存方法
冰袋运输。≤-20℃避光干燥保存，至少六个月有效。避免反复冻融。
注意事项
1）避免反复冻融，可根据单次用量分装保存。避免将本品储存于无霜冰箱。
2）DMSO有毒，请小心操作。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4）本产品仅作科研用途！
使用方法
本实验方案经牛肺动脉内皮细胞优化，且已被其他常规细胞系验证。但不同的细胞类型其最佳使用条件不同，还需用户根据该方案进行进一步优化。
1. 试剂准备
使用前将ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide)回温至室温，并简短离心使该DMSO溶液至管底。
2. 细胞样品处理及染色
2.1 将1 mM ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide)储存液按照实验要求稀释至工作浓度，推荐工作浓度为～1 µM。建议在不影响实验结果的前提下尽量使用较低浓度探针，以避免由于浓度过高染色导致的假象。
注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡盐溶液（HBSS/Ca/Mg）稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。
2.2 染色
对于贴壁细胞，吸除培养皿中培养基，用HBSS清洗细胞，加入预热的染料工作液于37℃孵育细胞15-30 min。吸除染色液，加入不含探针的新鲜培养液，并在荧光显微镜下观察细胞。
细胞如需固定，请参考以下步骤。
3．细胞固定
3.1 固定细胞：用4%甲醛于37℃固定细胞2 min。
注：已染色细胞用醛固定后，仅部分ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide)留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。
3.2 清洗观察细胞：细胞固定后，可用合适缓冲液进行清洗，每次5 min，共2次。清洗后可对细胞进行后续封片、镜检或进一步染色。
注：不建议对细胞进行透化处理，因为经Triton X-100透化后，无信号保留。
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20107ES72 |
Triton X-100 曲拉通X-100 |
250 mL |
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60162ES76 |
1× HBSS (with Ca2+, Mg2+), pH 7.4 |
500 mL |
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本品为，由红色荧光染料BODIPY® TR和 Glibenclamide 偶联而成，其Ex= 587 nm，Em= 615 nm。格列本脲（Glibenclamide, glyburide），一种常用降血糖药物，在胰岛β细胞、胰岛素的分泌、心肌衰竭细胞功能以及心律不齐的研究等方面具有重要科研用途。格列本脲高度结合ATP-敏感型K+通道的磺脲受体，且本受体富集存在内质网上，因此适合用作内质网荧光探针。
本品为溶于DMSO的1 mMER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide)储存液，推荐工作浓度为～1 μM。
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2）DMSO有毒，请小心操作。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4）本产品仅作科研用途！
使用方法
本实验方案经牛肺动脉内皮细胞优化，且已被其他常规细胞系验证。但不同的细胞类型其最佳使用条件不同，还需用户根据该方案进行进一步优化。
1. 试剂准备
使用前将ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide)回温至室温，并简短离心使该DMSO溶液至管底。
2. 细胞样品处理及染色
2.1 将1 mM ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide)储存液按照实验要求稀释至工作浓度，推荐工作浓度为～1 µM。建议在不影响实验结果的前提下尽量使用较低浓度探针，以避免由于浓度过高染色导致的假象。
注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡盐溶液（HBSS/Ca/Mg）稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。
2.2 染色
对于贴壁细胞，吸除培养皿中培养基，用HBSS清洗细胞，加入预热的染料工作液于37℃孵育细胞15-30 min。吸除染色液，加入不含探针的新鲜培养液，并在荧光显微镜下观察细胞。
细胞如需固定，请参考以下步骤。
3．细胞固定
3.1 固定细胞：用4%甲醛于37℃固定细胞2 min。
注：已染色细胞用醛固定后，仅部分ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide)留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。
3.2 清洗观察细胞：细胞固定后，可用合适缓冲液进行清洗，每次5 min，共2次。清洗后可对细胞进行后续封片、镜检或进一步染色。
注：不建议对细胞进行透化处理，因为经Triton X-100透化后，无信号保留。
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Q: 请问HBSS 里面的钙镁离子在里面起到什么作用？
A: 有利于维持细胞状态，利于后续的染色。
Q: 请问固定后的死细胞还能染上吗？
A: 该探针主要染的是活细胞的内质网，固定样本基本染不上色。
Q: 染色之后可以加抗荧光淬灭剂防止荧光淬灭吗？
A: 活细胞的染色，不需要加抗荧光淬灭封片液。
Q: 固定后的荧光还会淬灭么？或者说可以维持多长时间？
A: ER-Tracker Red 按照后附的使用说明染色后，用甲醛等固定后染色效果可以被部分保留， 荧光均会有淬灭的现象的。具体的荧光维持时间这边没有数据给您参考。
Q: 请问 mito-tracker green 和 ER-traker red 是同时染还是分开依次染，染完后荧光可持续多久（也就是在多长时间内还可以检测）？
A: 建议分开依次染色，荧光均存在淬灭的现象，染色完建议尽快检测，一般 1 小时内检测荧光强度基本变化不大。
[1] Zhou F, Hong Y, Liang R, et al. Rapid printing of bio-inspired 3D tissue constructs for skin regeneration. Biomaterials. 2020;258:120287. doi:10.1016/j.biomaterials.2020.120287(IF:10.317)
[2] Wu T, Wang X, Cheng J, et al. Nitrogen-doped graphene quantum dots induce ferroptosis through disrupting calcium homeostasis in microglia. Part Fibre Toxicol. 2022;19(1):22. Published 2022 Mar 24. doi:10.1186/s12989-022-00464-z(IF:9.400)
[3] Fu C, Zhan J, Huai J, et al. Furin-instructed molecular self-assembly actuates endoplasmic reticulum stress-mediated apoptosis for cancer therapy. Nanoscale. 2020;12(22):12126-12132. doi:10.1039/d0nr00151a(IF:7.790)
[4] Li B, Huang J, Liu J, et al. Discovery of a Nur77-mediated cytoplasmic vacuolation and paraptosis inducer (4-PQBH) for the treatment of hepatocellular carcinoma. Bioorg Chem. 2022;121:105651. doi:10.1016/j.bioorg.2022.105651(IF:5.275)