快速片段化/末端修复/A尾添加模块|Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent是针对Illumina®与MGI®高通量测序平台设计的新一代酶切法建库试剂。本品采用高质量的片段化酶，摆脱了繁琐的超声过程，同时简化了操作流程，将片段化模块与末端修复/加A模块合二为一，极大的降低了建库的时间和成本。可应用于500 pg-1 μg常规动植物基因组、微生物基因组等样本，在单管内实现DNA的片段化、末端修复和A尾添加反应。反应产物无需纯化，即可使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）或Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module（Cat#12604）进行文库构建中接头连接反应。
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 |
24 T |
96 T |
1000T |
|
12609 |
Smearase® Mix |
240 μL |
960 μL |
10mL |
运输与保存方法
冰袋运输。
-20℃保存，有效期1年。
注意事项
1）本试剂盒兼容范围为500 pg – 1 μg Input DNA。应尽可能使用A260/A280 = 1.8-2.0的高质量Input DNA。
2）若Input DNA中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐，可能会影响后续实验，建议将DNA稀释在ddH2O或不含EDTA的10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中进行片段化。
3）对于常规的高质量基因组DNA，酶切时间参考表1。本试剂盒片段化偏好低，耐受各种GC含量的模板。
表1 常规基因组DNA片段化时间推荐表
|
插入片段主峰大小 |
片段化时间 |
优化范围 |
|
600 bp |
5 min |
3-8 min |
|
350 bp |
8 min |
5-12 min |
|
250 bp |
10 min |
8-15 min |
|
200 bp |
13 min |
10-20 min |
|
150 bp |
20 min |
12-25 min |
【注】：以上为推荐时间，需客户在自己的实验体系中进行微调，以达到最佳效果。
4）参照片段化步骤推荐条件可将DNA酶切为所需大小，为保证优质稳定的片段化效果，片段化过程请于冰上操作。
5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6）本产品仅用作科研用途！
使用方法
DNA片段化/末端修复/dA尾添加（DNA Fragment/End Preparation/dA-Tailing）
该步骤将基因组DNA片段化，同时进行末端修复及dA尾添加。
1. 将表2中试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。
2. 于冰上配制表2反应体系。
表2 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应体系
|
名称 |
体积（μL） |
|
Input DNA |
x |
|
Smearase® Mix |
10 |
|
ddH2O |
Up to 60 μL |
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。
4. 将上述PCR管置于PCR仪，设置表3所示反应程序，进行DNA片段化，末端修复及dA尾添加反应。
表3 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应程序
|
温度 |
时间 |
|
热盖105°C |
On |
|
4 °C |
1 min* |
|
30 °C |
3-20 min** |
|
72 °C |
20 min |
|
4 °C |
Hold |
【注】：*DNA片段化过程为有效控制片段化效果，避免过度酶切，反应程序可预先设置4℃，待模块温度降至4℃时，将PCR管放入PCR仪即可。**对于完整的基因组DNA，酶切时间参考表1。
5. 产物如需纯化，可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。也可以直接驳接Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module（Cat#12604）或Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）试剂盒，进行接头连接。详细说明请见后者的说明书。
参考实例
使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent对小牛胸腺gDNA样本进行酶切，片段化结果见图1。
图1 Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent酶切800 ng小牛胸腺gDNA样本（不同酶切时间片段化效果检测）
HB220118
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent是针对Illumina®与MGI®高通量测序平台设计的新一代酶切法建库试剂。本品采用高质量的片段化酶，摆脱了繁琐的超声过程，同时简化了操作流程，将片段化模块与末端修复/加A模块合二为一，极大的降低了建库的时间和成本。可应用于500 pg-1 μg常规动植物基因组、微生物基因组等样本，在单管内实现DNA的片段化、末端修复和A尾添加反应。反应产物无需纯化，即可使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）或Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module（Cat#12604）进行文库构建中接头连接反应。
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 |
24 T |
96 T |
1000T |
|
12609 |
Smearase® Mix |
240 μL |
960 μL |
10mL |
运输与保存方法
冰袋运输。
-20℃保存，有效期1年。
注意事项
1）本试剂盒兼容范围为500 pg – 1 μg Input DNA。应尽可能使用A260/A280 = 1.8-2.0的高质量Input DNA。
2）若Input DNA中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐，可能会影响后续实验，建议将DNA稀释在ddH2O或不含EDTA的10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中进行片段化。
3）对于常规的高质量基因组DNA，酶切时间参考表1。本试剂盒片段化偏好低，耐受各种GC含量的模板。
表1 常规基因组DNA片段化时间推荐表
|
插入片段主峰大小 |
片段化时间 |
优化范围 |
|
600 bp |
5 min |
3-8 min |
|
350 bp |
8 min |
5-12 min |
|
250 bp |
10 min |
8-15 min |
|
200 bp |
13 min |
10-20 min |
|
150 bp |
20 min |
12-25 min |
【注】：以上为推荐时间，需客户在自己的实验体系中进行微调，以达到最佳效果。
4）参照片段化步骤推荐条件可将DNA酶切为所需大小，为保证优质稳定的片段化效果，片段化过程请于冰上操作。
5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6）本产品仅用作科研用途！
使用方法
DNA片段化/末端修复/dA尾添加（DNA Fragment/End Preparation/dA-Tailing）
该步骤将基因组DNA片段化，同时进行末端修复及dA尾添加。
1. 将表2中试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。
2. 于冰上配制表2反应体系。
表2 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应体系
|
名称 |
体积（μL） |
|
Input DNA |
x |
|
Smearase® Mix |
10 |
|
ddH2O |
Up to 60 μL |
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。
4. 将上述PCR管置于PCR仪，设置表3所示反应程序，进行DNA片段化，末端修复及dA尾添加反应。
表3 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应程序
|
温度 |
时间 |
|
热盖105°C |
On |
|
4 °C |
1 min* |
|
30 °C |
3-20 min** |
|
72 °C |
20 min |
|
4 °C |
Hold |
【注】：*DNA片段化过程为有效控制片段化效果，避免过度酶切，反应程序可预先设置4℃，待模块温度降至4℃时，将PCR管放入PCR仪即可。**对于完整的基因组DNA，酶切时间参考表1。
5. 产物如需纯化，可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。也可以直接驳接Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module（Cat#12604）或Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）试剂盒，进行接头连接。详细说明请见后者的说明书。
参考实例
使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent对小牛胸腺gDNA样本进行酶切，片段化结果见图1。
图1 Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent酶切800 ng小牛胸腺gDNA样本（不同酶切时间片段化效果检测）
HB220118
Q：12204ES、12907ES 和 12609ES 区别与联系？
A：12204 为完整的建库试剂盒，包含片段化模块，连接模块，扩增模块
12609 为片段化模块，可同时进行样本的片段化，末端修复/加 A 流程
12907 为单酶（原料酶），仅用于DNA 片段化
Q：OnePot DNA 建库试剂盒是一管完成建库，具体哪几步是一起完成，可以用哪几个建库模块替代？
A：OnePot DNA 建库试剂盒将片段化，末端修复/A 尾添加，三步一管完成。对应建库模块片段化/末修/加 A 对应 12609，接头连接对应 12607、文库扩增对应 12621。整个流程仅需 2.5-3h，简单高效。
Q：酶切法建库试剂盒是否适用于 Ion Torrent 平台？
A：不推荐，接头不匹配，仅适用于Illumina 平台。但试剂盒的酶切模块 12609 和连接模块 12607 可推荐。
暂无内容