注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

反应体系（以25 μL为例）

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系：推荐使用25 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准扩增程序

【注】：                                                                                          

a) 逆转录：42°C或者50°C均可，时间 10-15 min。

b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60°C。

c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

HB211220

Hifair^® Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。独特的Buffer设计，在体系中不包含影响冻干工艺的化学试剂，可用于一步法RT-qPCR冻干反应体系的配制和产品设计。

本试剂盒利用耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的冻干Buffer，Enzymes Mix等，缓冲液中已含有Mg²⁺和dNTP等，并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多重荧光定量扩增反应。

产品组分

【注】1) 4×Hifair^® Lyo-Buffer为Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。

2. Hifair^® Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase和UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

适用机型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex，Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™，Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon^®, Opticon^® 2, Chromo4™，Eppendorf Mastercycler^® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene^® Q, Rotor-Gene^® 3000, Rotor-Gene^® 6000，Roche Applied Science LightCycler^® 480, LightCycler^® 2.0; Lightcycler^® 96，Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler^®; Illumina Eco qPCR

运输与保存方式

1. 运输方式：冰袋运输。
2. 保存方式：

Part 1： 13800-A【4×Hifair^® Lyo-Buffer 】-20°C保存，有效期1年。           

13800-C【DEPC-treated Water (DNase、RNase free)】-20°C保存，有效期1年。        

Part 2： 13800-B【Hifair^® Lyo-Enzyme Mix 】4°C保存，有效期6个月。

3. 本品避免反复冻融。建议分装保存。