2×Hieff NGS®高GC多重PCR预混液|2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix

2×Hieff NGS®高GC多重PCR预混液|2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

本产品适用于多重PCR实验。2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix 以热启动多重PCR酶制剂 与 2×扩增缓冲液为组分配置成预混液。本预混液可兼容GC含量在 25%-70%左右的多重基因扩增,快速便捷地用于多重PCR反应,具备高均一性、高特异性和高灵敏度的特点。本试剂适用于不同多重PCR需求, 可用于凝胶电泳鉴定20对以内不同大小片段的多重产物,也可用于进行数百重及以上扩增子的富集。

 

组分信息

产品编号

组分名称

13283

2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix

 

储存条件

2~8℃保存,有效期2年

 

注意事项

1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

2.本产品仅用作科研用途!

 

参考反应体系

体积(μL)

终浓度

2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix

15

Primer mix

x

0.1 μM-0.5 μM

模板 DNA

1 ng -400 ng

无菌超纯水

up to 30

【注】:1)上表中 DNA 量和引物浓度均为推荐用量和浓度,可根据具体实验情况进行调整最适浓度。

2)参考建议:每条引物的浓度可在 0.1 μM-0.5 μM 范围内进行调整。

3)预混液中已经包含扩增所需要的酶、dNTP、盐离子等,无需额外添加。

第一轮扩增程序

循环步骤

温度(℃)

时间

循环数

预变性

95℃

3 min

1

变性

95℃

2×Hieff NGS®高GC多重PCR预混液|2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix20 sec

15-45

退火延伸

60℃

4-10 min

终延伸

72℃

5 min

1

【注】:在 PCR 仪上设置上表中的反应程序进行多重 PCR 反应(设置热盖温度至 105℃左右)。 退火延伸时间:100 重 PCR 推荐 4 min;1000 重推荐 8-10 min 需要自己根据引物情况摸索。

PCR 产物磁珠纯化: 建议在 30 μL 反应体系中加 27μL 磁珠(Cat:12601)进行产物纯化。

第二轮扩增程序

循环步骤

温度(℃)

时间

循环数

预变性

95℃

3 min

1

变性

95℃

2×Hieff NGS®高GC多重PCR预混液|2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix20 sec

15-45

退火

60℃

1 min

延伸

72℃

30 sec

终延伸

72℃

5 min

1

【注】:退火温度和时间上推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为1 min,可以在30 s-1 min 内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

PCR 产物磁珠纯化: 建议在 30 μL 反应体系中加 27μL 磁珠(Cat:12601)进行产物纯化。

 

Ver.CN20230816

Q:主要有哪些应用?

A:多基因分型、食品病原微生物检测等。

2×Hieff NGS®高GC多重PCR预混液|2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix

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本产品适用于多重PCR实验。2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix 以热启动多重PCR酶制剂 与 2×扩增缓冲液为组分配置成预混液。本预混液可兼容GC含量在 25%-70%左右的多重基因扩增,快速便捷地用于多重PCR反应,具备高均一性、高特异性和高灵敏度的特点。本试剂适用于不同多重PCR需求, 可用于凝胶电泳鉴定20对以内不同大小片段的多重产物,也可用于进行数百重及以上扩增子的富集。

 

组分信息

产品编号

组分名称

13283

2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix

 

储存条件

2~8℃保存,有效期2年

 

注意事项

1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

2.本产品仅用作科研用途!

 

参考反应体系

体积(μL)

终浓度

2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix

15

Primer mix

x

0.1 μM-0.5 μM

模板 DNA

1 ng -400 ng

无菌超纯水

up to 30

【注】:1)上表中 DNA 量和引物浓度均为推荐用量和浓度,可根据具体实验情况进行调整最适浓度。

2)参考建议:每条引物的浓度可在 0.1 μM-0.5 μM 范围内进行调整。

3)预混液中已经包含扩增所需要的酶、dNTP、盐离子等,无需额外添加。

第一轮扩增程序

循环步骤

温度(℃)

时间

循环数

预变性

95℃

3 min

1

变性

95℃

2×Hieff NGS®高GC多重PCR预混液|2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix20 sec

15-45

退火延伸

60℃

4-10 min

终延伸

72℃

5 min

1

【注】:在 PCR 仪上设置上表中的反应程序进行多重 PCR 反应(设置热盖温度至 105℃左右)。 退火延伸时间:100 重 PCR 推荐 4 min;1000 重推荐 8-10 min 需要自己根据引物情况摸索。

PCR 产物磁珠纯化: 建议在 30 μL 反应体系中加 27μL 磁珠(Cat:12601)进行产物纯化。

第二轮扩增程序

循环步骤

温度(℃)

时间

循环数

预变性

95℃

3 min

1

变性

95℃

2×Hieff NGS®高GC多重PCR预混液|2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix20 sec

15-45

退火

60℃

1 min

延伸

72℃

30 sec

终延伸

72℃

5 min

1

【注】:退火温度和时间上推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为1 min,可以在30 s-1 min 内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

PCR 产物磁珠纯化: 建议在 30 μL 反应体系中加 27μL 磁珠(Cat:12601)进行产物纯化。

 

Ver.CN20230816

Q:主要有哪些应用?

A:多基因分型、食品病原微生物检测等。

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