Hieff NGS^® Complete Adapter Kit for MGI^®是针对MGI^®高通量文库构建专用配套试剂盒，共分为3个Set，每个Set中包含8到96种不同的Barcode接头，适用于MGI^®高通量测序平台多样品DNA文库构建。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度保证了文库构建的稳定性和可重复性。

Set 1：8 index ，41-48

Set 2：16 index ，57-72

Set 3：96 index

产品组分

编号	组分	2 T	4 T	100 T
13360	8 index	10 μL each	20 μL each	500 μL each
13361	16 index	10 μL each	20 μL each	500 μL each
13362	96 index	10 μL each	20 μL each	500 μL each

运输和保存方法

冰袋运输，-20℃保存，有效期18个月。

注意事项

1）切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融，可短暂存放于4℃。

2）使用Hieff NGS^® Complete Adapter Kit for MGI^®试剂盒构建的DNA文库结构如下：

   5’ – Bottom Adapter – Insert DNA Sequence – Barcode Adapter- 3’

3) 试剂盒中提供的每种DNA Adapter中都包含Bottom Adapter，且提供一种Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5）MGI接头最多有96种index，当使用96 index规格的产品进行建库测序时，index的选择需按照MGI推荐的组合进行操作，具体规格见使用方法。

6）本产品index序列请索要excel格式的文件，或在官网上下载。

7）接头浓度为10μM。

 

使用方法

DNA Adapter的序列如下：

Barcode Adapter：5’-phos-AGTCGGAGGCCAAGCGGTCTTAGGAAGACAAXXXXXXXXXXCAACTCCTTGGCTCACA-3’

Bottom Adapter：5’-TTGTCTTCCTAAGGAACGACATGGCTACGATCCGACTT-3’

¹XXXXXXXXXX表示接头的Barcode区域，其在每个接头中的序列见下表。测序前在Sample Sheet中只需输入这个Barcode序列（10 bp）即可。

图1. 96种MGI index成组规则

 

Index序列如下：

红色框中的8种index

Adapter编号	Index序列	Adapter编号	Index序列
01	TAGGTCCGAT	13	CGGCAATCCG
02	GGACGGAATC	14	ATCAGGATTC
03	CTTACTGCCG	15	TCATTCCAGA
04	ACCTAATTGA	16	GATGCTGGAT

 

蓝色框中的64种index

Adapter编号	Index序列	Adapter编号	Index序列
41	TTAGATGCAT	57	ATTCAACGGA
42	GTCCAGAGCT	58	AACTGTACTG
43	CACGTGATAG	59	GTACCTCAAT
44	CCACTAGTCC	60	GACTTCTAAT
45	TGGACTTGGC	61	TGAAGCGTTG
46	GCTTGACAGG	62	CGTGCGATCC
47	AAGACCTCTA	63	TCGGAAGGCA
48	AGTTGCCATA	64	CCGATGTCGC

 

Adapter编号	Index序列	Adapter编号	Index序列
65	ACTTAGAATG	73	GACAATGCTC
66	TCCAAGCCTG	74	GCTAATCACA
67	AGACGATGAT	75	AGTCCATAGG
68	CTCACAAGAC	76	CTATCGCCTA
69	CGTTCCTACT	77	ATCGTGGTCT
70	GTGGTTGTGA	78	TGGCTAATAC
71	GAAGGCCTGC	79	CAGTGCAGAG
72	TAGCTTGCCA	80	TCAGGCTGGT

 

Adapter编号	Index序列	Adapter编号	Index序列
81	ATACTCACGC	89	CACCATGTCT
82	ATGCTCCGCG	90	ATATGTCTGG
83	TGTGAACTTG	91	AAGGAAGCGT
84	GAGAGGTGCT	92	TCAAGACGTC
85	TGCACTGTAA	93	CCGCTCAGTA
86	GCCTAGGCAA	94	GGTGTGTACA
87	CCATCATAGC	95	TTCACGTAAG
88	CATGGTAATT	96	GGTTCCACAC

 

Adapter编号	Index序列	Adapter编号	Index序列
97	AGGTATTCTT	121	CCTTGATCAA
98	CGAATGCAAC	122	GGAAGTGGCA
99	TTCAACGGCG	123	AACATTCTAC
100	CTCGGCGGAA	124	GACGCGAGTC
101	ACGGTAATGG	125	CTATAACACT
102	GATCCGACGT	126	AGTCTCGTGT
103	TCACGATACA	127	TCGGCCTATG
104	GATTCTCTTC	128	TTGCAGACGG

 

紫色框中的24种index

Adapter编号	Index序列	Adapter编号	Index序列	Adapter编号	Index序列
25	TAGAGGACAA	33	GCAACGATGG	49	ATGTACGCAG
26	CCTAGCGAAT	34	TAATCGTTCA	50	TTAATGAGAT
117	ATGTCTATCC	35	GTTCGCTCTA	51	TGCGCCACTT
28	GCTGAGCTGT	36	TCTCACACAT	52	CATTAAGGCC
29	AACCTAGATA	37	CTGTTAGGAT	53	CCGCCTCAGA
30	TTGCCATCTC	38	CGCAGACGCG	116	GCTCCATGAC
114	CCAGAGTCAG	39	AAGGATCATC	55	GCCGGTTATC
32	CGCTATCGGC	115	AACAGGCAGT	56	GGAATATTGA

 

说明：

4 个 Adapter 成组：第 1 列（01-04，13-16），共计 2 组（图 1 红色框）；

8 个 Adapter 成组：第 2-9 列（41-48、57-64、65-72、73-80、81-88、89-96、97-104 和 121-128），共计 8 组（图 1  蓝色框）；

24 个 Adapter 成组：第 10-12 列，共计 1 组（图 1  紫色框）。

 

成组规则：

1）样本数1-4：选择红色框中index；也可以选择蓝色框中的index，尽量选择一列上的index，不要跨列选择。

2）样本数5–24：选择蓝色框中的index进行操作，尽量先选择同一列上的index，然后再选择第二列

3）样本数25–64：按照规格2进行操作；也可以选择紫色框中的所有index，然后加上蓝色框中的index。但不可以一部分index选择紫色框，一部分选择其他组别。

4）样本数：65–72：选择蓝色框中的所有index，然后再加上红色框中的index。

5）样本数：73–96：可以选择紫色框中全部index，再加红色框或蓝色框中的index.

 

【注】请按照以上说明，选择合适的接头进行文库构建，否则影响后期下机数据的拆分（不按照要求使用，会造成下机数据拆分均一性较差）

HB220530

Q: 接头中 index/Barcode 组合原则是什么？

A: 碱基平衡，荧光平衡（详情可查看翊圣生物公众号微信软文“一文全面解析NGS 接头的奥秘”）

Q: 双端接头，连接过程的注意事项，长接头和短接头有区别吗？

A: 长接头带完整的 index 序列，所以接头连接的时候直接完成文库构建，此时如果文库浓度达到测序要求，那么可以直接PCR-Free 建库；短接头建库，接头连接步骤双端同时连接相同的 PE Adapter。