MolPure^® Gel Extraction Kit采用MolPure^® DNA Column G1和高效的溶胶体系，适用于从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收长度为100 bp–40 kb的高质量DNA片段。回收过程中不需要用到有毒的酚、氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀。操作简便，溶胶时间短，加入溶胶液体积小，20 min即可完成整个纯化过程。试剂盒内的MolPure^® DNA Column G1可选择性吸附高达8 μg的DNA片段，不吸附酶、矿物油和其它杂质，得到的DNA纯度高，可直接用于后续酶切、连接、转化、测序和文库构建等实验。

 

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		19101ES08 (5 T)	19101ES50 (50 T)	19101ES70 (200 T)
19101-A	DNA 吸附柱 (MolPure® DNA Column G1)	5 个	50 个	200 个
19101-B	2 mL 收集管 (2 mL Collection Tube G1)	5 个	50 个	200 个
19101-C	缓冲液 AC (AC Buffer G1)	0.5 mL	5 mL	20 mL
19101-D	溶胶液 BD (BD Buffer G1)	2 mL	20 mL	80 mL
19101-E	漂洗液 W* (Wash Buffer*)	1.3 mL	13 mL	50 mL
19101-F	洗脱液 (Elution Buffer)	1 mL	10 mL	20 mL

运输和保存方法

常温运输，常温保存。产品有效期12个月。

 

注意事项

1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

2. 注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可37℃温浴复溶至溶液澄清，避免影响使用效果。

3. 溶胶液BD中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。且应注意避免强光直射。

4. PCR扩增产物和酶切产物等反应体系的纯化，建议使用MolPure^® PCR Purification Kit（Cat#19106）。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

6. 本产品仅作科研用途！

 

实验前准备

1. 自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，无水乙醇，离心管等。

2. 除特殊指明外，所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到13,000 rpm转速的传统台式离心机。

3. 首次使用前，在漂洗液W*（19101-E）瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。如果发现漂洗液W*由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持漂洗液W*中的乙醇含量。

 

操作方法

一、样本预处理：

1. 称重含有目的片段的琼脂糖凝胶。

2. 每100 mg 1% 琼脂糖加入100 µL溶胶液BD。

【注】：对于高浓度的琼脂糖凝胶，溶胶液BD加入量需等比例增加。

3. 50~60℃水浴10 min。期间每2-3 min轻微颠倒混匀，直至胶块完全融化。

【注】：对于400 bp以下片段，建议加入0.3倍体积的异丙醇，可显著提高回收率。

二、DNA产物纯化：

1.（选做）向DNA吸附柱G1中加入100 µL缓冲液AC，13,000 rpm离心1 min，弃掉废液。

【注】：仅限临近效期3个月内的产品进行此项操作，常规产品选做此项操作。

【注】：处理后的DNA吸附柱G1仅限当天使用。

2. 将样本混合液加入到DNA吸附柱G1中，室温放置1 min，12,000 rpm离心1 min，弃掉废液。

【注】：混合液每次最大加入体积750 µL，可分多次离心。

3. 将DNA吸附柱G1放回收集管，加入700 µL漂洗液W*，12,000 rpm室温离心30 s，弃废液。

【注】：确保漂洗液W*已添加无水乙醇。

4. 加入500 µL漂洗液W*，12,000 rpm室温离心30 s，弃废液。

5 将DNA吸附柱G1放回收集管，空柱12,000 rpm室温离心2 min，室温晾干5 min。以除去残留的漂洗液W*。

6. 将DNA吸附柱G1放入新的离心管（自备）中，在DNA吸附柱G1中央加入50 µL洗脱液，室温放置2 min。然后12,000 rpm离心1min。收集滤液，即为DNA溶液。

【注】：可通过以下方式提高回收产量：①70℃预热洗脱液；②将DNA滤液再次上柱，室温放置2 min后，洗脱。

7. DNA溶液可置于-20℃长期保存。    

 

HB220623

 

Q：需要多长时间的操作时间？

A：操作简便：20 min 即可完成纯化

Q：胶回收试剂盒回收率为多少？

A：回收率>60%，最高可达 90%。

Q：胶回收可以直接回收 PCR 原液吗？

A：可以。溶液还是加溶胶液，只是不用置于 50-60℃温浴了，其他步骤不变。 比例为 PCR 原液 50 uL体系，加 200 uL 溶胶液。片段小的话，也按照说明书的方式加入异丙醇。但更推荐专门的PCR产物纯化试剂盒（货号：19106ES）。 

Q: 回收效率低怎么办？

A: 回收小片段，可以多加溶胶液，溶胶后可以加入0.3 倍体积的异丙醇，可显著提高回收率；另外使用70℃预热的洗脱液也可以提高回收产量。

Q：加了溶胶液BD后溶液呈紫色什么原因呢？正常吗？

A: 如溶液颜色为橙色或紫色，建议加入10μL 3M醋酸钠（pH值5.2）溶液混合。混合物的颜色变成黄色

后进行后续实验，黄色是DNA结合的最佳pH值。

Q: 回收率低,有什么建议吗？

A: 1）电泳的时候，用新鲜的电泳液，不新鲜的会导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力;

2）切胶的时候在保证目的片段的情况下，尽可能的减少胶体积，并且减少紫外灯下的暴露时间;

3）观察加了溶胶液后混合物的颜色，如果是如溶液颜色为橙色或紫色，需要加入10μL3M醋酸钠（pH值5.2）溶液混合。混合物的颜色变成黄色后进行后续实验;

4）溶胶要完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数;

5）加洗脱液前，可适当延长室温晾干时间;

6）70℃预热洗脱液，可提高回收率，加洗脱液时注意加到膜中央，延长室温静置时间。