细胞/组织总RNA提取试剂盒|MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit
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COA
已发表文献
MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit 采用 MolPure® DNA 清除/RNA 吸附通用柱技术和和新型的溶液体系，适用于从多种新鲜或冻存的动物组织或培养细胞中高效率提取高纯度、高质量的总 RNA。提取过程不需要用到有毒的酚、氯仿、β-巯基乙醇等有机溶剂，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀。操作简便，15 min 即可完成动物组织或细胞(10-30 mg 动物组织或 (1-10)×106 个动物细胞)总 RNA 的提取。试剂盒内的 MolPure® DNA 清除/RNA 吸附通用柱可轻松滤除去基因组 DNA和高效吸附 RNA。提取的总 RNA 纯度高，可用于 RT-PCR、qPCR、分子克隆和 RNase 保护分析等多种分子生物学实验。
产品信息
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货号 |
19221JP08 / 19221JP50 / 19221JP60 |
|
规格 |
5 T /50 T / 100 T |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
19221JP08 |
19221JP50 |
19221JP60 |
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19221-A |
DNA 清除/RNA 吸附通用柱(MolPure® DNA removing/RNA binding Column A2) |
10 个 |
100 个 |
200个 |
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19221-B |
2 mL 收集管 (2 mL Collection Tube A2) |
10 个 |
100 个 |
200个 |
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19221-C |
裂解液 LB (LB Buffer A2) |
3 mL |
30 mL |
60 mL |
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19221-D |
去蛋白液 PL (PL Buffer A2) |
4 mL |
40 mL |
80 mL |
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19221-E |
结合液 BD* (BD Buffer A2 *) |
1 mL |
10 mL |
20 mL |
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19221-F |
漂洗液 W* (Wash Buffer A2 *) |
1.3 mL |
13 mL |
26 mL |
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19221-G |
RNase-free H2O |
1 mL |
5 mL |
10 mL |
储存条件
室温避光保存，有效期2年。2-8℃可保存更长时间。
注意事项
1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
2. 注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可 37℃温浴复溶至溶液澄清，避免影响使用效果。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
4. 本产品仅作科研用途！
使用说明
使用前准备
1. 自备设备和试剂：台式离心机、水浴锅或金属浴，1.5 mL RNase-free 离心管，液氮，无水乙醇等。
2. 本试剂盒可以抑制 RNase 活性，不需要低温离心，所有的离心步骤常温进行。
3. 首次使用前，在结合液 BD*（19221-E）瓶中加入标签指定量的无水乙醇（5 T/50 T/100T 分别加入 2.4 mL/24 mL/48 mL 无水乙醇）， 充分混匀后使用，并做好标记。
4. 首次使用前，在漂洗液 W*（19221-F）瓶中加入标签指定量的无水乙醇
（5 T/50 T /100T分别加入 5.2 mL/52 mL/104mL 无水乙醇）， 充分混匀后使用，并做好标记。
操作方法
一、样本预处理
- 针对动物组织：新鲜组织(< 20 mg)加入 350 μL 裂解液 LB，用玻璃匀浆器或电动匀浆器将组织研磨均匀。若用液氮研磨，需磨成细粉后再加入对应量的裂解液 LB，剧烈震荡 20 s，充分混匀。
- 针对贴壁细胞：不需消化，直接裂解；或离心收集细胞后，加入 350 μL 裂解液 LB (< 5×10 6 个细胞)，用移液器反复吹打混匀(直到看不到细胞团为止)。
- 针对悬浮细胞：直接离心收集细胞，加入 350 μL 裂解液 LB (< 5×10 6 个细胞)，用移液器反复吹打混匀(直到看不到细胞团为止)。
【注】：组织量 20-30 mg 加入 600 μL 裂解液 LB
【注】：(5-10)×10 6个细胞加入 600 μL 裂解液 LB
二、RNA 提取
1. 将处理好的匀浆液加到 DNA 清除/RNA 吸附通用柱上(柱子放在 2 mL 收集管内)，13,000 rpm 离心 1 min，收集含有 RNA 的滤液。
2. 精确估算滤液体积中加入等体积的结合液 BD*(请先确认已加入无水乙醇!)，立即轻柔吹打混匀。
3. 将上述混合液全部加入新的 DNA 清除/RNA 吸附通用柱中，13,000 rpm 离心 30 s，弃掉滤液。
4. 加入 700 μL 去蛋白液，室温 30 s，13,000 rpm 离心 30 s，弃掉滤液，将 DNA 清除/RNA 吸附通用柱重新放回 2 mL 收集管中。
5. 加入 500 µL 漂洗液 W*(请先确认已加入无水乙醇!)，13,000 rpm 离心 30 s，弃掉滤液。
6. 重复一遍步骤 5，将 DNA 清除/RNA 吸附通用柱重新放回 2 mL 收集管内。
7. 空柱 13,000 rpm 离心 2 min，除去残留漂洗液 W*。
8. 将 DNA 清除/RNA 吸附通用柱放入新的 1.5 mL RNase-free 离心管中，在膜中央加入 30-50 µL RNase-free H2O，室温放置 1 min，然后 13,000 rpm 离心 1 min，收集滤液，即为 RNA 溶液。样品可置于-80℃长期保存。
【注】：可通过以下方式提高回收产量：①65℃预热 RNase-free H2O；②将 RNA 滤液再次上柱，室温放置 1 min 后，洗脱。
MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit 采用 MolPure® DNA 清除/RNA 吸附通用柱技术和和新型的溶液体系，适用于从多种新鲜或冻存的动物组织或培养细胞中高效率提取高纯度、高质量的总 RNA。提取过程不需要用到有毒的酚、氯仿、β-巯基乙醇等有机溶剂，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀。操作简便，15 min 即可完成动物组织或细胞(10-30 mg 动物组织或 (1-10)×106 个动物细胞)总 RNA 的提取。试剂盒内的 MolPure® DNA 清除/RNA 吸附通用柱可轻松滤除去基因组 DNA和高效吸附 RNA。提取的总 RNA 纯度高，可用于 RT-PCR、qPCR、分子克隆和 RNase 保护分析等多种分子生物学实验。
产品信息
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货号 |
19221JP08 / 19221JP50 / 19221JP60 |
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规格 |
5 T /50 T / 100 T |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
19221JP08 |
19221JP50 |
19221JP60 |
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DNA 清除/RNA 吸附通用柱(MolPure® DNA removing/RNA binding Column A2) |
10 个 |
100 个 |
200个 |
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19221-B |
2 mL 收集管 (2 mL Collection Tube A2) |
10 个 |
100 个 |
200个 |
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19221-C |
裂解液 LB (LB Buffer A2) |
3 mL |
30 mL |
60 mL |
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去蛋白液 PL (PL Buffer A2) |
4 mL |
40 mL |
80 mL |
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19221-E |
结合液 BD* (BD Buffer A2 *) |
1 mL |
10 mL |
20 mL |
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漂洗液 W* (Wash Buffer A2 *) |
1.3 mL |
13 mL |
26 mL |
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19221-G |
RNase-free H2O |
1 mL |
5 mL |
10 mL |
储存条件
室温避光保存，有效期2年。2-8℃可保存更长时间。
注意事项
1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
2. 注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可 37℃温浴复溶至溶液澄清，避免影响使用效果。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
4. 本产品仅作科研用途！
使用说明
使用前准备
1. 自备设备和试剂：台式离心机、水浴锅或金属浴，1.5 mL RNase-free 离心管，液氮，无水乙醇等。
2. 本试剂盒可以抑制 RNase 活性，不需要低温离心，所有的离心步骤常温进行。
3. 首次使用前，在结合液 BD*（19221-E）瓶中加入标签指定量的无水乙醇（5 T/50 T/100T 分别加入 2.4 mL/24 mL/48 mL 无水乙醇）， 充分混匀后使用，并做好标记。
4. 首次使用前，在漂洗液 W*（19221-F）瓶中加入标签指定量的无水乙醇
（5 T/50 T /100T分别加入 5.2 mL/52 mL/104mL 无水乙醇）， 充分混匀后使用，并做好标记。
操作方法
一、样本预处理
- 针对动物组织：新鲜组织(< 20 mg)加入 350 μL 裂解液 LB，用玻璃匀浆器或电动匀浆器将组织研磨均匀。若用液氮研磨，需磨成细粉后再加入对应量的裂解液 LB，剧烈震荡 20 s，充分混匀。
- 针对贴壁细胞：不需消化，直接裂解；或离心收集细胞后，加入 350 μL 裂解液 LB (< 5×10 6 个细胞)，用移液器反复吹打混匀(直到看不到细胞团为止)。
- 针对悬浮细胞：直接离心收集细胞，加入 350 μL 裂解液 LB (< 5×10 6 个细胞)，用移液器反复吹打混匀(直到看不到细胞团为止)。
【注】：组织量 20-30 mg 加入 600 μL 裂解液 LB
【注】：(5-10)×10 6个细胞加入 600 μL 裂解液 LB
二、RNA 提取
1. 将处理好的匀浆液加到 DNA 清除/RNA 吸附通用柱上(柱子放在 2 mL 收集管内)，13,000 rpm 离心 1 min，收集含有 RNA 的滤液。
2. 精确估算滤液体积中加入等体积的结合液 BD*(请先确认已加入无水乙醇!)，立即轻柔吹打混匀。
3. 将上述混合液全部加入新的 DNA 清除/RNA 吸附通用柱中，13,000 rpm 离心 30 s，弃掉滤液。
4. 加入 700 μL 去蛋白液，室温 30 s，13,000 rpm 离心 30 s，弃掉滤液，将 DNA 清除/RNA 吸附通用柱重新放回 2 mL 收集管中。
5. 加入 500 µL 漂洗液 W*(请先确认已加入无水乙醇!)，13,000 rpm 离心 30 s，弃掉滤液。
6. 重复一遍步骤 5，将 DNA 清除/RNA 吸附通用柱重新放回 2 mL 收集管内。
7. 空柱 13,000 rpm 离心 2 min，除去残留漂洗液 W*。
8. 将 DNA 清除/RNA 吸附通用柱放入新的 1.5 mL RNase-free 离心管中，在膜中央加入 30-50 µL RNase-free H2O，室温放置 1 min，然后 13,000 rpm 离心 1 min，收集滤液，即为 RNA 溶液。样品可置于-80℃长期保存。
【注】：可通过以下方式提高回收产量：①65℃预热 RNase-free H2O；②将 RNA 滤液再次上柱，室温放置 1 min 后，洗脱。
Q：260/280 的比值只有 1.6 几？
A：若 OD260/OD280＜1.6：有可能有蛋白质残留，氨基酸残基中的苯环在 280nm 处有吸收从而造成比值偏低，当然也有可能是其他苯环物质（酚类）造成的。可以用蛋白酶 k 进行处理；加入变性剂使蛋白变性。或者用氯仿进行抽提。
Q：19221 提取脂肪可以么？
A：脂肪这个不好提取，可以先离心后再过柱，样本用量不要过大，脂肪组织不好研磨。而且提取的浓度或者纯度不会好，推荐传统方式。
Q：样本用 trizol 裂解了，可以用这个吗？
A：可以，就是把 trizol 代替我们的裂解液，其他步骤不变。
Q：SPL 蛋白液有结晶析出。有影响吗？
A：没有影响，这是是胍盐析出，蒸发的问题，有析出说明饱和了。不影响。
Q：为啥试用装和正式的试剂盒 wash buffer 里加入无水乙醇的倍数不同，这会影响提取的浓度吗？
A：乙醇是用来沉淀核酸的，乙醇多的话容易把更多的核酸沉淀到膜上，即提取浓度会高些，但是相对的，wash buffer 的量是相对少的，这个组分是用来洗脱杂质的，它少了提取的纯度会不好。
Q：样本储存在trizol 里，还能用该试剂盒抽提吗？
A：可以，trizol 充当裂解液使用，其他步骤不变。
Q：LB buffer A2 和BD buffer A2有结晶析出。
A：这两个试剂中含有离液盐，将其放置37℃，晶体溶解后混匀再使用。
Q：说明书中写到可加β-巯基乙醇，加这个目的是什么？能不加吗？
A：用于变性Rnase，破坏二硫键，防止RNA降解。如果提取的RNA质量好可以不加。
Q: 这款提取产品有不适用的组织类型吗？
A: 高脂、高蛋白多糖、高纤维等样本不建议用本产品做提取，比如脂肪组织，脑组织，心脏组织，软骨组织等。
Q：19221和19211有什么区别？
A：19211是基于Trizol裂解和离心柱纯化的原理，适应于多种类型的样本，19221是柱式提取试剂盒，仅对细胞，组织进行提取
Q:19221和19231有什么区别？
A:19221是对于细胞和组织，19231仅针对细胞进行核酸提取。另外针对的细胞量不一样，19231适应于细胞数< 1×106情况，19221适合(5-10)×106个细胞。
[1] Wang S, Li Y, Zhong L, et al. Efficient gene editing through an intronic selection marker in cells. Cell Mol Life Sci. 2022;79(2):111. Published 2022 Jan 31. doi:10.1007/s00018-022-04152-1(IF:9.261)
[2] Wang T, Yang J, Lin G, et al. Effects of Dietary Mannan Oligosaccharides on Non-Specific Immunity, Intestinal Health, and Antibiotic Resistance Genes in Pacific White Shrimp Litopenaeus vannamei. Front Immunol. 2021;12:772570. Published 2021 Nov 24. doi:10.3389/fimmu.2021.772570(IF:7.561)
[3] Wang S, Huang J, Liu F, et al. Isosteviol Sodium Exerts Anti-Colitic Effects on BALB/c Mice with Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Through Metabolic Reprogramming and Immune Response Modulation. J Inflamm Res. 2021;14:7107-7130. Published 2021 Dec 20. doi:10.2147/JIR.S344990(IF:6.922)
[4] Wang S, Huang J, Liu F, et al. Isosteviol Sodium Exerts Anti-Colitic Effects on BALB/c Mice with Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Through Metabolic Reprogramming and Immune Response Modulation. J Inflamm Res. 2021;14:7107-7130. Published 2021 Dec 20. doi:10.2147/JIR.S344990(IF:6.922)
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